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    如何培養MCF-7細胞?

    MCF-7培養方案:

    MCF-7

    使用Eagle's MEM,補充10%FBS,1%青霉素/鏈霉素。還可以添加非必需氨基酸(0.1 mM),胰島素(10ug / mL)和丙酮酸鈉(1mM)。向培養基中加入10nM雌激素,使細胞數增加3-4倍。在潮濕,濃縮的CO2(5%)氣氛中保持37°C的溫度。

    一旦MCF-7細胞在平板上達到約90%匯合,通過用1xPBS沖洗兩次來除去培養基和傳代細胞。

    向細胞中加入2-3mL溫熱(37℃)0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液以分散細胞層。在倒置顯微鏡下觀察。分散應該在5到15分鐘之間發生。如果細胞沒有正確分離,將燒瓶放回37°C孵育室。不要孵育超過3分鐘左右。注意:在分散過程中,不要通過敲擊或搖動燒瓶來攪拌冷藏。當細胞脫落時,這可能導致結塊。

    一旦MCF-7細胞層分散(在37℃下3分鐘),通過在無菌管中向10mL完全生長培養基(參見步驟1)中加入5ml細胞/胰蛋白酶-EDTA使胰蛋白酶失活。輕輕吹打吸出細胞

    將細胞在125xg力下在生長培養基中離心5分鐘。

    從管中取出胰蛋白酶/生長培養基懸浮液。

    將沉淀(MCF-7細胞)重懸于10 mL新鮮生長培養基中(參見步驟1)

    1mL懸浮液加入到含有9mL原始生長培養基的每個新平板中(參見步驟1),并在37℃下在潮濕的5%CO 2氣氛中孵育。

    建議采用1:3或1:6的傳代培養比例

    如上所述,我們使用DMEM,但含有5%FBS(且不含抗生素或胰島素)。說實話,任何生長培養基都適用于這些細胞。至于抗生素和胰島素 - 它們是不必要的。由于歷史原因,胰島素已被包括在許多乳腺培養物中。如果您使用胰島素與無胰島素進行“并排”比較,您將看到沒有差異(正如我們所做的那樣)。此外,關于胰蛋白酶消化,我們常規使用0.05%胰蛋白酶-EDTA并在T75中加入2mL 2-3分鐘,然后用全培養基中和。這一直對我們有利。

    MCF-7細胞直達。


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    上海傳秋生物科技有限公司
    Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
           公司主要依托復旦大學、同濟大學等上海地區多家著名高校,擁有一支富有經驗的開發團隊,專業從事細胞及細胞...
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