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    細胞凍存液凍存后復蘇細胞的最佳方案?

    我需要解凍凍存的MCF7和T47D細胞系,但它們被冷凍超過6個月,我擔心存儲條件和細胞成活率,有任何最佳方案的提示?



    如果將細胞保存在液氮罐中(細胞凍存),細胞就會很好。記得要快速解凍并慢慢冷凍。

    我會有一管至少14毫升的培養基,溫度升至37攝氏度,為細胞做好準備。

    我從LN2取一個小瓶,通過攪拌冷凍小瓶在37攝氏度的水浴中快速加熱。解凍應該只需要1分鐘或更短。

    解凍后,用14ml培養基倒入試管中,以1000RPM離心10分鐘。去除上清液。

    加入1至2毫升培養基,加入1-2個T75培養瓶中,培養基中含有14毫升培養基。

    這適用于1x106細胞/ T75燒瓶,如果你少用T25,總共8mls培養基。

    如果它們存儲在-80中與上面相同,唯一的區別可能是由于可行性百分比,首先增長需要更長的時間。


    我們凍存和復蘇了許多細胞類型。細胞通常培養基+血清中7.5%DMSO通常是最佳的-細胞凍存液。

    在添加到細胞之前混合DMSO,因為純DMSO在接觸時殺死細胞-細胞凍存液。為了解凍細胞,最關鍵的步驟是稀釋DMSO。

    這是我們的核心方案,對于大多數細胞類型,它們具有90-98%的活力,只要它們在凍存之時是健康的并且分開良好。

    回收原料:小瓶快速解凍,例如在溫水浴中。通過溫和移液將細胞從小瓶底部重懸浮,轉移至20ml管中,并通過逐漸加入20ml含有血清的培養基稀釋。

    重要的是:非常緩慢地逐滴稀釋。例如,在約30秒內混合(通過旋轉)加入1ml,在10秒內加入1ml,然后在30秒內保持18ml。(注意,冷凍培養基是高度高滲的:超過4倍等滲。)

    DMSO需要時間從細胞中擴散出來,或者它們會破裂。離心,重懸于完全培養基中并以所需密度(通常高于正常)鋪板。


    細胞凍存液

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    上海傳秋生物科技有限公司
    Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
           公司主要依托復旦大學、同濟大學等上海地區多家著名高校,擁有一支富有經驗的開發團隊,專業從事細胞及細胞...
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