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    細胞培養小常識

    1.切記,細胞培養基的儲存條件是2-8℃。如果細胞培養基不小心被凍,您應該融化培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生,培養基可以正常使用,如果出現沉淀,只能丟棄這些培養基。

    2.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養基,可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,碳酸氫鈉導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口,在CO2培養箱孵育培養基10-15min,來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。

    3.當在無血清培養基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養條件下,抗生素不被滅活,可能對于細胞達到毒性水平。

    4.一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

    5.總之,大部分添加物和試劑最多可以凍融3次,如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,將會影響它的性能。

    6.血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補體系統。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往公認的操作步驟,并沒有確鑿的證據說明這樣做是有益的。相反,對大部分細胞而言,GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因為加熱可能使血清中的沉淀增加,使您誤以為污染。

    7.在進行傳代培養時,我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代,不進行活性檢測,您可能接種比你認為的低得多的濃度的細胞,這常??赡軐е律L緩慢或培養物根本不生長。

     

    8.在訂購的細胞到達后,應立即復蘇,如果培養基還沒有準備好,可將其放入液氮中,盡快復蘇。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內。

     

    9.細胞復蘇往往是比較容易出問題的步驟。請在訂購細胞時就向供應商索取詳細的復蘇步驟,并仔細閱讀。有些供應商就不推薦在復蘇時離心,對此類細節,應特別留意。

     

    如何避免血清中沉淀物的產生?

     

    1. 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。并隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。

     

    2. 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。

     

    3.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

     

    4.若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30min的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。


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