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    H9 人胚胎干細胞
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    • 常見問題

    細胞系使用說明書

    細胞名稱

    H9胚胎干細胞

    種屬

    細胞來源

    上海市東方醫院

    生長特性

    貼壁 球形克隆

    培養條件

    培養基:STEMCELL的mTSR1,人胚胎干細胞無飼養層培養基

    溫度:37℃     氣相:95%空氣,5% CO2

     

    傳代

    1.75%酒精噴灑整個培養瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代,每次傳代48h后一天換一次;

    2.待細胞克隆還沒開始融合時,需要對其進行傳代,傳代比例為1:4;

    3傳代步驟:將1 mg/mL膠原酶IV消化液置于37°預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加2 ml預熱好的膠原酶,置于37°孵育消化(第一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為最佳消化時間,記錄最佳消化時間,以便于下次消化,前30min觀察一次,之后每15min觀察一次一般孵育30-60min左右,消化好后加入5ml完全培養基。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之完全脫落,然后收集細胞懸液,置于15ml離心管中,待細胞自然沉降后將上層Collagenase-type IV吸除,加入hES完全培養液5 ml,吹打2-3次,待細胞自然沉降后將上層培養液吸除。再加入培養液重懸細胞傳代。每次傳代后48h內不要移動。

    保存

    凍存條件:60%完全培養基+30%FBSES級)+10%DMSO

    (備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預熱后使用。)

    保存條件:液氮存儲

    供應限制

    僅供研究之用

    常見問題及解決方案

    1.培養瓶有破裂,培養液有漏液:細胞極大可能會污染,所以我們會及時安排幫老師解決。

    2.細胞漂?。号囵B瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2小時后觀察,如細胞大部分又貼回瓶底,表明細胞活力正常,剩余漂浮的細胞可以去掉,留8-10ml培養液培養觀察,細胞生長至匯合度80%,進行消化傳代;如細胞還是不貼壁,將細胞離心收集轉到新培養瓶,原培養瓶加部分培養液繼續培養,中間注意觀察,我們的技術人員會一直跟蹤指導,直到問題解決。

     



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