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    小鼠白細胞介素22ELISA試劑盒Mouse IL-22ELISA KIT
    貨號:HM-021
    價格:¥3400.00/2120.00.00
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    • 常見問題

    小鼠IL-22定量分析酶聯免疫檢測試劑盒

     

    本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養上清液中的IL-22濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整, 如有產品包裝破損或質量投拆,請在收到貨一個月之內聯系我們。

     

    IL-22簡介:

    白細胞介素22(IL-22),屬于IL-10細胞因子家族,該家族其它成員包括IL-10, IL-19, IL-20, IL-24 IL-26等,這些成員都有一部分相同的氨基酸序列,但生物功能卻是迥異的。

    IL-22主要由活化的Th1型T細胞和NK細胞分泌,主要作用于上皮細胞和炎癥反應,小鼠的IL-22cDNA編碼含33個氨基酸信號肽的179個氨基酸的蛋白,與大鼠的IL-22有82%的同源性,與人的IL-10有78%的同源性。

    IL-22通過Th2細胞抑制IL-4的產生,能夠在肝和胰臟內誘導產生急性相反應物,IL-22的信號都是通過都屬于II型細胞因子受體的IL-22R和IL-10R-β/CRF2-4來介導的。

     

    檢測原理:

    本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中小鼠IL-22的濃度。小鼠IL-22捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的小鼠IL-22會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗小鼠IL-22抗體后,抗小鼠IL-22抗體與小鼠IL-22接合,形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合,親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來;其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在IL-22將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,小鼠IL-22濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中IL-22濃度。

     

    小鼠IL-22定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

    組分

    規格(96T/48T)

    小鼠IL-22預包被板

    12條/6

    標準品稀釋液

    10ml/5ml

    小鼠IL-22標準品

    2支/1支(凍干)

    小鼠IL-22生物素化抗體

    10ml/5ml

    親和素連接的HRP酶

    10ml/5ml

    濃縮洗滌液 20×

    30ml/15ml

    TMB底物

    10ml/5ml

    中止液

    5ml/3ml

    封板膠紙

    3/2

    說明書

    1

    標本收集:

    1.標本的收集請按下列流程進行操作;

    A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可;

    B.血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

    C.血漿標本,推薦用EDTA的方法收集

    D.若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融。

    2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑;

    3.標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

    4.請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確。

    注意事項:

    1.試劑盒請保存在28℃。

    2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶,請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

    3.標準品復溶加樣后,剩余部份請丟棄。

    4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

    5.加樣時,請及時更換槍頭,避免交叉污染。

    6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。

    7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要,在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

    8.室溫反應,請嚴格控制在25~28℃。

    9.洗滌過程是至關重要的,洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

    10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

    11.加樣過程中避免氣泡的產生。

    12.血清和血漿標本的檢測時,檢測抗體的孵育時間應適當延長。

     

    檢測前準備工作:

    1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫(25-28℃)平衡20分鐘;每次檢測后剩余試劑請及時于2~8℃保存。

    2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

    3. 如有5×標準品稀釋液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4份水)。

    4.標準品:按標簽復溶體積加入標準品稀釋液使IL-22終濃度達到2000pg/ml,室溫反應,請嚴格控制在25~28℃,靜置15~20分鐘后輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,最高濃度為2000pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)

    圖片2.png 

    洗滌方法:

    自動洗板機或人工洗板:每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

     

    實驗過程需自備的材料:

    1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭;   

    2.酶標儀;

    3.自動洗板機;                     

    4.去離子水或雙蒸水;

     

    操作步驟:

    1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存于4℃。

    2.建議設置本底較正孔,即空白孔,設置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。

    3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中,用封板膠紙封住反應孔,室溫(25-28℃)孵育120分鐘。

    4.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    5.加入生物素化抗體工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,室溫(25-28℃)孵育60分鐘。    

    6.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    7.加入HRP酶結合物工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。

    8.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    9.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。

    10.加入中止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。

     

     

    結果判斷:

    1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效,復孔的值平均后可作為測量值。

    2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。

    3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

    4.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。

     

    典型數值和參考曲線

    濃度pg/ml

    典型OD1

    典型OD2

    OD平均值

    0

    0.069

    0.074

    0.0715

    62.5

    0.276

    0.251

    0.2635

    125

    0.47

    0.465

    0.4675

    250

    0.817

    0.806

    0.8115

    500

    1.187

    1.124

    1.1555

    1000

    1.729

    1.709

    1.719

    2000

    2.435

    2.384

    2.4095

    小鼠IL-22參考標準曲線

    1.png 

    注意:本圖僅供參考,應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。

     

    靈敏度,特異性和重復性:

    1.靈敏度:多次重復結果表明,最小檢出量為22.6pg/ml。

    2.特異性:與小鼠IL-15,IL-20,IL-22R,IL-29,Leptin,LIF,MIF, TNF-α,TNF-β等沒有交叉反應。

    3.重復性:板內,板間變異系數均<10%.

     

    參考文獻:

    1. Pestka, S. et al. (2004) Annu. Rev. Immunol. 22:929.

    2. Xie, M.H. et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:31335.

    3. Kotenko, S.V. and J.A. Langer. (2004) Int. Immunopharmacol. 4:593.

    4. Boniface, K. et al. (2005) J. Immunol. 174:3695.

    5. Nagalakshmi, M.L. et al. (2004) Int. Immunopharmacol. 4:679.

    6. Ikeuchi, H. et al. (2005) Arthritis Rheum. 52:1037.9.


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