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    小鼠伽馬干擾素(高敏)ELISA試劑盒Mouse IFN-γ ELISA KIT(high sensitive)
    貨號:HM-032
    價格:¥3400.00/2120.00.00
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    小鼠伽馬干擾素定量分析酶聯免疫檢測試劑盒(高敏)

     

    本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養上清液中的IFN-γ濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整,。如有產品包裝破損或質量投拆,請在收到貨一個月之內聯系我們。

     

    IFN-γ簡介:

    被稱為II型干擾素的IFN-γ,是由143個殘基構成的,有20和25kDa亞型的糖蛋白,以頭尾相連的同型糖蛋白的形式存在。

    IFN-γ由T淋巴細胞和NK細胞產生,用以抗病毒和干擾增殖,此外,IFN-γ還有與免疫調節相關的幾種功能包括調節細胞的增殖和程序性死亡,刺激或抑制不同基因的表達。

    IFN-γ能通過誘導產生吲哚胺2,3-雙加氧酶來抗弓形蟲和衣原體的感染。IFN-γ是效應強烈的單核吞噬細胞增強劑,IFN-γ是通過增強單核吞噬細胞的Mac-1的表達來達到增強胞飲作用和吞噬作用的。IFN-γ通過增加巨噬細胞的氧自由基和TNF-α的釋放來達到增強殺腫瘤細胞的作用。IFN-γ選擇性地提高包括因LPS刺激的B細胞的IgG2a和因2T細胞呈遞抗原而引起的B細胞的IgG3的釋放量。有報道稱IFN-γ能引起細胞的自分泌IFN-γ作用的增強。

     

    檢測原理:

    本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中小鼠IFN-γ的濃度。小鼠IFN-γ捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的小鼠IFN-γ會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗小鼠IFN-γ抗體后,抗小鼠IFN-γ抗體與小鼠IFN-γ接合,形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合,親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來;其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在IFN-γ將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,小鼠IFN-γ濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中小鼠IFN-γ濃度。

     

    小鼠IFN-γ定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

    組分

    規格(96T/48T)

    小鼠IFN-γ預包被板(高敏)

    12條/6

    標準品稀釋液

    10ml/5ml

    小鼠IFN-γ標準品

    4支/2支(凍干)

    小鼠IFN-γ生物素化抗體(高敏)

    10ml/5ml

    親和素連接的HRP酶

    10ml/5ml

    濃縮洗滌液 20×

    30ml/15ml

    TMB底物

    10ml/5ml

    中止液

    5ml/3ml

    封板膠紙

    3/2

    說明書

    1

    標本收集:

    1.標本的收集請按下列流程進行操作;

    A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可;

    B.血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

    C.血漿標本,推薦用EDTA的方法收集

    D.若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融。

    2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑;

    3.標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

    4.請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確。

     

    注意事項:

    1.試劑盒請保存在28℃。

    2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶,請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

    3.標準品復溶加樣后,剩余部份請丟棄。

    4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

    5.加樣時,請及時更換槍頭,避免交叉污染。

    6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。

    7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要,在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

    8.室溫反應,請嚴格控制在25~28℃。

    9.洗滌過程是至關重要的,洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

    10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

    11.加樣過程中避免氣泡的產生。

    12.血清和血漿標本的檢測時,檢測抗體的孵育時間應適當延長。

     

    檢測前準備工作:

    1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫(25-28℃)平衡20分鐘;每次檢測后剩余試劑請及時于2~8℃保存。

    2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

    3.如有5X標準品稀釋液,請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4水)。

    4.標準品: 按標簽復溶體積加入標準品稀釋液復溶使IFN-γ終濃度達到400pg/ml,室溫反應,請嚴格控制在25~28℃,靜置15~20分鐘后輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,最高濃度為400 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)

    圖片2.png 

    洗滌方法:

    自動洗板機或人工洗板:每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

     

    實驗過程需自備的材料:

    1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭;   

    2.酶標儀;

    3.自動洗板機;                     

    4.去離子水或雙蒸水;

     

    操作步驟:

    1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存于4℃。

    2.建議設置本底較正孔,即空白孔,設置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。

    3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中,用封板膠紙封住反應孔,室溫(25-28℃)孵育120分鐘。4.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    5.加入生物素化抗體工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,室溫(25-28℃)孵育60分鐘。   

    6.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    7.加入親和素連接的HRP酶工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。

    8.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    9.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。

    10.加入中止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。

     

    結果判斷:

    1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效,復孔的值平均后可作為測量值。

    2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。

    3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

    4.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。

     

    典型數值和參考曲線

    濃度pg/ml

    典型OD1

    典型OD2

    OD平均值

    0

    0.092

    0.104

    0.098

    12.5

    0.212

    0.284

    0.248

    25

    0.366

    0.402

    0.384

    50

    0.636

    0.676

    0.656

    100

    1.025

    1.109

    1.067

    200

    1.617

    1.741

    1.679

    400

    2.349

    2.785

    2.567

    小鼠IFN-γ參考標準曲線

    圖片1.png 

    注意:本圖僅供參考,應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。

     

    靈敏度,特異性和重復性:

    1.靈敏度:多次重復結果表明,最小檢出量為1.8pg/ml。

    2.特異性:與人IFN-γ和大鼠IFN-γ沒有交叉反應。

    3.重復性:板內,板間變異系數均<10%.

     

    參考文獻:

     uziel and Greene, 1990  J. Invest. Dermatol., 94:275

     Parkinson et al., 1988  J.  Immunol. Methods, 15:105


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