亚洲精品456在线播放

  • <rp id="cdedk"></rp>
  • <tbody id="cdedk"><noscript id="cdedk"></noscript></tbody>

    <button id="cdedk"><object id="cdedk"></object></button>
  • <s id="cdedk"><object id="cdedk"></object></s><rp id="cdedk"><object id="cdedk"><blockquote id="cdedk"></blockquote></object></rp><button id="cdedk"><object id="cdedk"></object></button>

  • <rp id="cdedk"><strike id="cdedk"></strike></rp>
    申請試用裝
    小鼠細胞間粘附分子1ELISA試劑盒MouseICAM-1 ELISA KIT
    貨號:HM-043
    價格:¥3400.00/2120.00.00
    加入購物車,提交訂單信息之后,我們會第一時間與您取得聯系!
    • 產品信息
    • 產品說明(可下載)
    • 參考文獻
    • 常見問題

    小鼠血管細胞粘附蛋白1定量分析酶聯免疫檢測試劑盒

     

    本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養上清液中的VCAM-1濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整。如有產品包裝破損或質量投拆,請在收到貨一個月之內聯系我們。

     

    VCAM-1 簡介:

    血管細胞粘附蛋白1VCAM1),也叫CD106,屬于免疫球蛋白家族的粘附分子。VCAM1715個氨基酸構成的I型跨膜糖蛋白,胞外部分674個氨基酸,跨膜部分22個氨基酸,胞內有19個氨基酸的尾巴。根據不同種裂解方式,VCAM1胞外部分有6Ig樣結構域和7Ig樣結構域的兩個類型。VCAM1 可以在不同種類細胞表面表達,這些種類的細胞包括活化的內皮細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞、神經元細胞、平滑肌細胞、成纖維細胞和卵母細胞等。

    VCAM1與整合素α4β1 (VLA4) α4β7結合,從而發揮許多功能。這此功能包括VCAM1在白細胞的遷移、白細胞粘附內皮細胞、信號傳導等生理過程中起作用。VCAM1在沉滯性動脈硬化癥和風濕性關節炎中都起作用。

     

    檢測原理:

    本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中VCAM-1的濃度。VCAM-1捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的VCAM-1會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗小鼠VCAM-1抗體后,抗小鼠VCAM-1抗體與VCAM-1接合,形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合,親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來;其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在VCAM-1將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,VCAM-1濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中VCAM-1濃度。

     

    小鼠VCAM-1定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

     

    組分

    規格(96T/48T)

    小鼠VCAN-1預包被板

    12條/6

    5×標準品稀釋液

    20ml/10ml

    小鼠VCAN-1標準品

    2支/1支(凍干)

    小鼠VCAN-1生物素化抗體

    10ml/5ml

    親和素連接的HRP酶

    10ml/5ml

    濃縮洗滌液 20×

    30ml/15ml

    TMB底物

    10ml/5ml

    中止液

    5ml/3ml

    封板膠紙

    3/2

    說明書

    1

    標本收集:

    1.標本的收集請按下列流程進行操作;

    A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可;

    B.血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

    C.血漿標本,推薦用EDTA的方法收集

    D.若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融。

    2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑;

    3.標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

    4.請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確。

    注意事項:

    1.試劑盒請保存在28℃。

    2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶,請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

    3.標準品復溶加樣后,剩余部份請丟棄。

    4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

    5.加樣時,請及時更換槍頭,避免交叉污染。

    6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。

    7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要,在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

    8.室溫反應,請嚴格控制在2528℃。

    9.洗滌過程是至關重要的,洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

    10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

    11.加樣過程中避免氣泡的產生。

    12.血清和血漿標本的檢測時,檢測抗體的孵育時間應適當延長。

     

    檢測前準備工作:

    1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫(25-28℃)平衡20分鐘;每次檢測后剩余試劑請及時于2~8℃保存。

    2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

    3.如有5X標準品稀釋液,請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4水)。

    4.標準品: 按標簽復溶體積加入1X標準品稀釋液復溶使VCAM-1終濃度達到8000pg/ml,室溫反應,請嚴格控制在25~28℃,靜置15~20分鐘后輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,最高濃度為8000 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)

    圖片2.png 

    洗滌方法:

    自動洗板機或小鼠工洗板:每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

     

    實驗過程需自備的材料:

    1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭;   

    2.酶標儀;

    3.自動洗板機;                     

    4.去離子水或雙蒸水;

     

    操作步驟:

    1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存于4℃。

    2.建議設置本底較正孔,即空白孔,設置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。

    3. 分別將標本或不同濃度標準品(100ul/)加入相應孔中,用封板膠紙封住反應孔,室溫(2528℃)孵育120分鐘。如果是血清血漿樣本,不同樣本稀釋比例不一樣,一般范圍在血清血漿樣本稀釋1000~15000倍,如無明確范圍,建議從1000倍開始稀釋,如果樣本濃度過高,超過檢測范圍,請加大稀釋倍數后重新稀釋檢測。

    4.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    5.加入生物素化抗體工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,室溫(25-28℃)孵育60分鐘。    

    6.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    7.加入親和素連接的HRP酶工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。

    8.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    9.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。

    10.加入中止液50ul/,混勻后即刻測量OD450值。

     

    結果判斷:

    1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效,復孔的值平均后可作為測量值。

    2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。

    3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

    4.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。

     

    典型數值和參考曲線

    濃度pg/ml

    典型OD1

    典型OD2

    OD平均值

    0

    0.093

    0.067

    0.08

    250

    0.245

    0.169

    0.207

    500

    0.396

    0.352

    0.374

    1000

    0.582

    0.546

    0.564

    2000

    0.935

    0.867

    0.901

    4000

    1.487

    1.431

    1.459

    8000

    2.304

    2.104

    2.204

    小鼠VCAM-1參考標準曲線

    圖片1.png 

    注意:本圖僅供參考,應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。

     

    靈敏度,特異性和重復性:

    1.靈敏度:多次重復結果表明,最小檢出量為45.8pg/ml

    2.特異性:與小鼠E-Selectin、ICAM-1、L-Selectin、P-SelectinVCAM-1沒有交叉反應。

    3.重復性:板內,板間變異系數均<10%

     

    參考文獻:

    1. Feuerbach, D. and J.H.M. Feyen (1997) FEBS Lett. 402:21.

    2. Moy, P. et al. (1993) J. Biol. Chem. 268:8835.

    3. Steffen, B.J. et al. (1996) Am. J. Pathol. 148:1819.

    4. Terry, R.W. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5919.

    5. Simmons, P.J. et al. (1997) Baillieres Clin. Haematol. 10:485.


    相關產品
    貨號 產品名稱 規格 價格 指令
    HM-043 小鼠細胞間粘附分子1ELISA試劑盒MouseICAM-1 ELISA KIT 96T/48T ¥3400.00/2120.00.00 放入購物車 》
    公司簡介 / Company profile
    上海傳秋生物科技有限公司
    Shanghai Chuan Qiu Biotechnology Co.,Ltd.
           公司主要依托復旦大學、同濟大學等上海地區多家著名高校,擁有一支富有經驗的開發團隊,專業從事細胞及細胞...
    聯系我們 / Contact
    電 話:021-69950217  69950218
    傳 真:021-69950218
    郵 箱:2078251929@qq.com
    郵 編:201800
    地 址:上海市嘉定區翔江公路518號寅尚產業園D座210室
    Copyright ? 2018 CHUANQIU Biotechnology Co.,Ltd. All Rights Reserved.

    滬公網安備 31011402008568號

    滬ICP備18030131號
  • 申請試用裝
  • 021-69950218

  • 亚洲精品456在线播放