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    小鼠胰島素ELISA試劑盒Mouse insulin ELISA KIT
    貨號:HM-051
    價格:¥4200.00/2120.00.00
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    小鼠胰島素定量分析酶聯免疫檢測試劑盒

     

    本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測小鼠血清、血漿或細胞培養上清液中的胰島素濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整。如有產品包裝破損或質量投拆,請在收到貨一個月之內聯系我們。

     

    胰島素簡介:

    胰島素是糖代謝中最主要的激素之一。胰腺的?細胞島細胞產生胰島素前體蛋白,前體蛋白被加工成C肽和胰島素。它們以等摩爾濃度進入血循環中。成熟的胰島素由A、B兩條鏈組成。這兩條鏈是通過兩個二硫鍵橋接形成有功能的胰島素分子。

    血漿葡萄糖濃度的變化是胰島素產生并分泌的最主要刺激因素,產生的胰島素具有一些代謝調節作用。其最主要的作用是,將外周血中糖轉運到肝臟中貯存起來。一些諸如肝糖生成障礙或在促進血糖升高的激素諸如胰高血糖素、腎上腺素、生長激素和皮質醇等作用下促進肝糖分解都可拮抗胰島素的作用。

     

    檢測原理:

    本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中胰島素的濃度。胰島素捕獲抗體已預包被于酶標板上,當同時加入標本或參考品和HRP耦連的抗小鼠胰島素抗體時,其中胰島素不同位點會與捕獲抗體和HRP耦連的抗小鼠胰島素抗體結合,形成夾心復合物,錨定在固相載體板上,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在胰島素將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,胰島素濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中胰島素濃度。

     

    小鼠胰島素定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

    組分

    規格(96T/48T)

    小鼠胰島素預包被板

    12條/6

    標準品稀釋液

    10ml/5ml

    小鼠胰島素標準品

    2支/1支(凍干)

    小鼠胰島素抗體HRP結合物

    10ml/5ml

    濃縮洗滌液 20×

    30ml/15ml

    TMB底物

    10ml/5ml

    終止液

    5ml/3ml

    封板膠紙

    3/2

    說明書

    1

     

    標本收集:

    1.標本的收集請按下列流程進行操作;

    A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可;

    B.血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

    C.血漿標本,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,

    D.標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融。

    2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑;

    3.標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

    4.請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確。

     

    注意事項:

    1.試劑盒請保存在28℃。

    2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶,請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

    3.標準品復溶加樣后,剩余部分請丟棄。

    4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

    5.加樣時,請及時更換槍頭,避免交叉污染。

    6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。

    7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要,在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

    8.室溫反應,請嚴格控制在25~28℃。

    9.洗滌過程是至關重要的,洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

    10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

    11.加樣過程中避免氣泡的產生。

    12.血清和血漿標本的檢測時,檢測抗體的孵育時間應適當延長。

     

    檢測前準備工作: 

    1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫25~28℃平衡20分鐘;每次檢測后剩余試劑請及時于2~8℃保存。

    2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

    3.如有5X標準品稀釋液,請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4水)。

    4.標準品: 按標簽復溶體積加入標準品稀釋液復溶使胰島素終濃度達到5.5ng/ml,室溫反應,請嚴格控制在25~28℃,靜置10~15分鐘后輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,最高濃度為5.5ng/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)

    圖片2.png 

    洗滌方法:

    自動洗板機或人工洗板:每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

     

    實驗過程需自備的材料:

    1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭;      

    2.酶標儀;

    3.自動洗板機;                        

    4.去離子水或雙蒸水;         

     

    操作步驟:

    1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存于4℃。

    2.建議設置本底較正孔,即空白孔,設置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。

    3.分別將標本或不同濃度標準品(10ul/孔)加入相應孔中,快速加入小鼠胰島素抗體HRP結合物(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,室溫25~28℃孵育120分鐘。

    4.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    5.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫25~28℃孵育20分鐘。

    6.加入終止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。

     

    結果判斷:

    1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效,復孔的值平均后可作為測量值。

    2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。

    3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

    4.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。

    典型數值和參考曲線

    濃度ng/ml

    典型OD1

    典型OD2

    OD平均值

    0

    0.0985

    0.0845

    0.0915

    0.171875

    0.2773

    0.1695

    0.2234

    0.34375

    0.401

    0.2482

    0.3246

    0.6875

    0.5348

    0.4146

    0.4747

    1.375

    0.79

    0.6894

    0.7397

    2.75

    1.4492

    1.2896

    1.3694

    5.5

    2.3381

    2.1695

    2.2538

    小鼠胰島素參考標準曲線

    圖片1.png 

    注意:本圖僅供參考,應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。

     

    靈敏度,特異性和重復性:

    1.靈敏度:多次重復結果表明,最小檢出量為0.1ng/ml。

    2.特異性:不與IGF-I、IGF-II、 小鼠 C肽、大鼠 C肽反應,與豬胰島素、綿羊胰島素、大鼠胰島素、牛胰島素及人胰島素分別有628%,256%,146%,110%和195%交叉反應。

    3.重復性:板內,板間變異系數均<10%.

     

    參考文獻:

    Korner J, Savontaus E, Chua SC, Jr., Leibel RL, Wardlaw SL (2001) Leptin regulation of Agrp and Npy mRNA in the mousehypothalamus. J Neuroendocrinol 13:959-966

    Olsson R and Carlsson PO (2005) Better vascular engraftment and function in pancreatic islets transplanted without prior culture. Diabetologia 48:469-476

    Rydtren T and Sandler S (2002) Efficacy of 1400 W, a novel inhibitor of inducible nitric oxide synthase, in preventing interleukin-1beta-induced suppression of pancreatic islet function in vitro and multiple low-dose streptozotocin-induced diabetes in vivo. Eur J Endocrinol 147:543- 551 10


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