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    小鼠免疫球蛋白G ELISA試劑盒Mouse total IgG ELISA KIT
    貨號:HM-071
    價格:¥3400.00/2120.00.00
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    小鼠總免疫球蛋白G(IgG定量

    分析酶聯免疫檢測試劑盒

     

    使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整, 本試劑盒僅供科研使用。如有產品包裝破損或質量投拆,請在收到貨一個月之內聯系我們。

     

    1.IgG簡介

    免疫球蛋白GIgG)主要由脾、淋巴結中的漿細胞合成和分泌,以單體形式存在。在個體發育過程中機體在出生后第3個月開始合成IgG,3~5歲接近成年人水平。IgG是血清中主要的抗體成分,約占血清總Ig75%。

    免疫球蛋白G在免疫應答中起著激活補體,中和多種毒素的作用,是機體抗感染的主要物質。

    IgG是四鏈單體,根據IgG分子γ鏈抗原性差異,人IgG有4個亞類:IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(小鼠4個亞類是IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)。不同IgG亞類的生物學活性有所差異。IgG的半衰期相對較長,約為20~30天。

     

    2.檢測原理

    本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測小鼠來源樣本中的總IgG濃度。IgG捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的IgG會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入與HRP耦連的抗IgG抗體后,抗小鼠IgG抗體與IgG接合,形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在IgG將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,IgG濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中IgG濃度。

     

    3.試劑盒組成

    3.1、預包被板12條/6條(96T/48T);

    3.2、標準品2瓶/1瓶(96T/48T),凍干;  

    3.3、20×標準品稀釋液,1瓶10ml/5ml(96T/48T);

    標準曲線中0濃度標準品以標準品稀釋液直接加入。

    3.4、即用型抗IgG抗體的HRP酶結合物1瓶, 5ml/2.5ml(96T/48T)

    3.5、TMB底物溶液,1瓶10ml/5ml(96T/48T);

    3.6、中止液,1瓶5ml;

    3.7、濃縮洗滌液(20×),1瓶30ml/15ml(96T/48T);

    3.8、封板紙3張/2張(96T/48T);

    3.9、說明書一份;

     

    4.檢測中需要但沒有提供而需要自備的材料:

    4.1、振蕩混勻器。

    4.2、可控溫水浴箱  37。

    4.3、ELISA酶標儀(450nm)。

    4.4、移液槍頭等         

             

    5.注意事項

    5.1、未開封的試劑應保存在2-8。

    包裝箔袋開封后,應立即封緊。開封后的包被微孔板儲存在2-8下可以穩定6個星期。

    5.2、所有試劑和所需的微孔板條在使用前應平衡至室溫。

    5.3、使用前將濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20稀釋(例如:10ml濃縮洗滌液應用蒸餾水稀釋至終體積200ml)。

    5.4、稀釋后的洗滌液在2-8下可以保存4個星期。

    5.5、樣本收集

    血清和EDTA處理的血漿樣本。避免使用明顯溶血、黃疸、脂血樣本。使用的血清和EDTA血漿樣本,按常規方法制備。樣品在2-8下保存不超過24小時。如果樣品需要長期存放(3個月以上),應凍存在-20。使用過程中應避免反復凍融。

     

    6.檢測過程

    所有的試劑和樣本在使用前應平衡至室溫并搖勻(搖勻過程應保證無泡沫產生)。一旦檢測開始,應連續操作,不中斷。開始分析前,推薦準備好所有試劑,打開瓶蓋,將所需微孔板條固定等等,以防止實驗中出現不必要的時間拖延。使用每種試劑、標準品或樣品時,都應更換一次性移液槍頭,以免交叉污染。

     

    7.檢測步驟

    7.1、將所需微孔板條在微孔架上固定,按1份標準品稀釋液加19份超純水或去離子水提前稀釋成標準品稀釋液的工作原理;

    7.2、移取10μl稀釋好的標準品以及樣本至相應微孔中,樣本需稀釋100000倍以上。

    提前稀釋標準品:加入標準品稀釋液100μl至凍干標準品瓶中使IgG終濃度達到100ng/ml,請嚴格控制在25~28℃,靜置10~15分鐘后輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,最高濃度為100ng/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)

    圖片2.png

     

    7.3、 每孔加90μl標準品稀釋液,25~28℃孵育120分鐘;

    7.4、 用洗滌液將微孔洗滌5次(推薦使用洗板機)。

    重要提示:

    洗滌液加入板孔中,需浸泡10秒,最后一次必須在干凈的吸水紙上用力拍打微孔,除去殘留洗滌液。洗滌操作的正確與否將影響整個實驗分析的靈敏度和精密度。

    7.5、每孔加50μlHRP耦連的抗IgG抗體,,25~28℃孵育60分鐘;

    7.6、用洗滌液將微孔洗滌5次(推薦使用洗板機)。

    7.7、每孔加入100ul底物溶液。室溫避光孵育15分鐘(25-28)。

    7.8、每孔加入50ul終止液,終止酶反應。并在450nm處測定OD值(參考波長600-650nm)。讀取OD值最好在10分鐘內完成。

     

    8.結果計算

    在方格座標紙上,以標準品的濃度作為橫坐標(對數刻度),對應的OD值作為縱坐標(線性刻度)。利用連接的標準曲線可讀出樣本的OD值對應的濃度值。試劑濃度需乘以稀釋倍數。

    任何樣品濃度如果高于最高標準品濃度,樣品應用標準品稀釋液作適當稀釋后重新測量分析。所得結果乘以稀釋倍數后即樣品實際濃度。

     

     

    9.參考數據及曲線

                      典型參考數據

    濃度(ng/ml)

    典型OD值1

    典型OD值2

    OD平均值

    0

    0.0892

    0.0844

    0.0868

    3.125

    0.2437

    0.2161

    0.2299

    6.25

    0.4529

    0.4127

    0.4328

    12.5

    0.6826

    0.6214

    0.652

    25

    0.9627

    0.9295

    0.9461

    50

    1.3792

    1.3354

    1.3573

    100

    1.9563

    1.9107

    1.9335

    小鼠IgG參考標準曲線

    圖片1.png 

    10.靈敏度、特異性和重復性

    1.靈敏度:多次重復結果表明,最小檢出量為1.24ng/ml。

    2.特異性:本試劑盒采用特異性抗體識別小鼠IgG,包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3,檢測值為總的IgG濃度。

    3.重復性:板內,板間變異系數均<10%.

     


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