小鼠總免疫球蛋白G(IgG）定量

分析酶聯免疫檢測試劑盒

使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整, 本試劑盒僅供科研使用。如有產品包裝破損或質量投拆，請在收到貨一個月之內聯系我們。

1.IgG簡介

免疫球蛋白G（IgG）主要由脾、淋巴結中的漿細胞合成和分泌，以單體形式存在。在個體發育過程中機體在出生后第3個月開始合成IgG，3～5歲接近成年人水平。IgG是血清中主要的抗體成分，約占血清總Ig的75%。

免疫球蛋白G在免疫應答中起著激活補體，中和多種毒素的作用，是機體抗感染的主要物質。

IgG是四鏈單體，根據IgG分子中γ鏈抗原性差異，人IgG有4個亞類：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4（小鼠4個亞類是IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3）。不同IgG亞類的生物學活性有所差異。IgG的半衰期相對較長，約為20～30天。

2.檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測小鼠來源樣本中的總IgG濃度。IgG捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標本或參考品時，其中的IgG會與捕獲抗體結合，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入與HRP耦連的抗IgG抗體后，抗小鼠IgG抗體與IgG接合，形成夾心的免疫復合物，其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑，若樣本中存在IgG將會形成免疫復合物，辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質，在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測，讀其450nm處的OD值，IgG濃度與OD450值之間呈正比，通過參考品繪制標準曲線，對照未知樣本中OD值，即可算出標本中IgG濃度。

3.試劑盒組成

3.1、預包被板12條/6條(96T/48T)；

3.2、標準品2瓶/1瓶(96T/48T)，凍干；  

3.3、20×標準品稀釋液，1瓶10ml/5ml(96T/48T)；

標準曲線中0濃度標準品以標準品稀釋液直接加入。

3.4、即用型抗IgG抗體的HRP酶結合物1瓶， 5ml/2.5ml（96T/48T）

3.5、TMB底物溶液，1瓶10ml/5ml（96T/48T）；

3.6、中止液，1瓶5ml；

3.7、濃縮洗滌液（20×），1瓶30ml/15ml（96T/48T）；

3.8、封板紙3張/2張（96T/48T）；

3.9、說明書一份；

4.檢測中需要但沒有提供而需要自備的材料：

4.1、振蕩混勻器。

4.2、可控溫水浴箱  37℃。

4.3、ELISA酶標儀（450nm）。

4.4、移液槍頭等         

5．注意事項

5.1、未開封的試劑應保存在2－8℃。

包裝箔袋開封后，應立即封緊。開封后的包被微孔板儲存在2－8℃下可以穩定6個星期。

5.2、所有試劑和所需的微孔板條在使用前應平衡至室溫。

5.3、使用前將濃縮洗滌液用蒸餾水按1：20稀釋（例如：10ml濃縮洗滌液應用蒸餾水稀釋至終體積200ml）。

5.4、稀釋后的洗滌液在2－8℃下可以保存4個星期。

5.5、樣本收集

血清和EDTA處理的血漿樣本。避免使用明顯溶血、黃疸、脂血樣本。使用的血清和EDTA血漿樣本，按常規方法制備。樣品在2－8℃下保存不超過24小時。如果樣品需要長期存放（3個月以上），應凍存在－20℃。使用過程中應避免反復凍融。

6.檢測過程

所有的試劑和樣本在使用前應平衡至室溫并搖勻（搖勻過程應保證無泡沫產生）。一旦檢測開始，應連續操作，不中斷。開始分析前，推薦準備好所有試劑，打開瓶蓋，將所需微孔板條固定等等，以防止實驗中出現不必要的時間拖延。使用每種試劑、標準品或樣品時，都應更換一次性移液槍頭，以免交叉污染。

7.檢測步驟

7.1、將所需微孔板條在微孔架上固定，按1份標準品稀釋液加19份超純水或去離子水提前稀釋成標準品稀釋液的工作原理；

7.2、移取10μl稀釋好的標準品以及樣本至相應微孔中，樣本需稀釋100000倍以上。

提前稀釋標準品:加入標準品稀釋液100μl至凍干標準品瓶中使IgG終濃度達到100ng/ml，請嚴格控制在25～28℃，靜置10~15分鐘后輕輕混懸（建議抽吸幾次）待徹底溶解，用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。（標準曲線取七個點，最高濃度為100ng/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.）

7.3、 每孔加90μl標準品稀釋液，25～28℃孵育120分鐘；

7.4、 用洗滌液將微孔洗滌5次（推薦使用洗板機）。

重要提示：

洗滌液加入板孔中，需浸泡10秒，最后一次必須在干凈的吸水紙上用力拍打微孔，除去殘留洗滌液。洗滌操作的正確與否將影響整個實驗分析的靈敏度和精密度。

7.5、每孔加50μlHRP耦連的抗IgG抗體，，25～28℃孵育60分鐘；

7.6、用洗滌液將微孔洗滌5次（推薦使用洗板機）。

7.7、每孔加入100ul底物溶液。室溫避光孵育15分鐘（25－28℃）。

7.8、每孔加入50ul終止液，終止酶反應。并在450nm處測定OD值（參考波長600－650nm）。讀取OD值最好在10分鐘內完成。

8．結果計算

在方格座標紙上，以標準品的濃度作為橫坐標（對數刻度），對應的OD值作為縱坐標（線性刻度）。利用連接的標準曲線可讀出樣本的OD值對應的濃度值。試劑濃度需乘以稀釋倍數。

任何樣品濃度如果高于最高標準品濃度，樣品應用標準品稀釋液作適當稀釋后重新測量分析。所得結果乘以稀釋倍數后即樣品實際濃度。

9.參考數據及曲線

                  典型參考數據

小鼠IgG參考標準曲線

10．靈敏度、特異性和重復性

1.靈敏度：多次重復結果表明，最小檢出量為1.24ng/ml。

2.特異性：本試劑盒采用特異性抗體識別小鼠IgG，包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3，檢測值為總的IgG濃度。

3.重復性：板內，板間變異系數均<10%.