分析酶聯免疫檢測試劑盒
使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整, 本試劑盒僅供科研使用。如有產品包裝破損或質量投拆,請在收到貨一個月之內聯系我們。
1.IgG簡介
免疫球蛋白G(IgG)主要由脾、淋巴結中的漿細胞合成和分泌,以單體形式存在。在個體發育過程中機體在出生后第3個月開始合成IgG,3~5歲接近成年人水平。IgG是血清中主要的抗體成分,約占血清總Ig的75%。
免疫球蛋白G在免疫應答中起著激活補體,中和多種毒素的作用,是機體抗感染的主要物質。
IgG是四鏈單體,根據IgG分子中γ鏈抗原性差異,人IgG有4個亞類:IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(小鼠4個亞類是IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)。不同IgG亞類的生物學活性有所差異。IgG的半衰期相對較長,約為20~30天。
2.檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測小鼠來源樣本中的總IgG濃度。IgG捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的IgG會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入與HRP耦連的抗IgG抗體后,抗小鼠IgG抗體與IgG接合,形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在IgG將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,IgG濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中IgG濃度。
3.試劑盒組成
3.1、預包被板12條/6條(96T/48T);
3.2、標準品2瓶/1瓶(96T/48T),凍干;
3.3、20×標準品稀釋液,1瓶10ml/5ml(96T/48T);
標準曲線中0濃度標準品以標準品稀釋液直接加入。
3.4、即用型抗IgG抗體的HRP酶結合物1瓶, 5ml/2.5ml(96T/48T)
3.5、TMB底物溶液,1瓶10ml/5ml(96T/48T);
3.6、中止液,1瓶5ml;
3.7、濃縮洗滌液(20×),1瓶30ml/15ml(96T/48T);
3.8、封板紙3張/2張(96T/48T);
3.9、說明書一份;
4.檢測中需要但沒有提供而需要自備的材料:
4.1、振蕩混勻器。
4.2、可控溫水浴箱 37℃。
4.3、ELISA酶標儀(450nm)。
4.4、移液槍頭等
5.注意事項
5.1、未開封的試劑應保存在2-8℃。
包裝箔袋開封后,應立即封緊。開封后的包被微孔板儲存在2-8℃下可以穩定6個星期。
5.2、所有試劑和所需的微孔板條在使用前應平衡至室溫。
5.3、使用前將濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20稀釋(例如:10ml濃縮洗滌液應用蒸餾水稀釋至終體積200ml)。
5.4、稀釋后的洗滌液在2-8℃下可以保存4個星期。
5.5、樣本收集
血清和EDTA處理的血漿樣本。避免使用明顯溶血、黃疸、脂血樣本。使用的血清和EDTA血漿樣本,按常規方法制備。樣品在2-8℃下保存不超過24小時。如果樣品需要長期存放(3個月以上),應凍存在-20℃。使用過程中應避免反復凍融。
6.檢測過程
所有的試劑和樣本在使用前應平衡至室溫并搖勻(搖勻過程應保證無泡沫產生)。一旦檢測開始,應連續操作,不中斷。開始分析前,推薦準備好所有試劑,打開瓶蓋,將所需微孔板條固定等等,以防止實驗中出現不必要的時間拖延。使用每種試劑、標準品或樣品時,都應更換一次性移液槍頭,以免交叉污染。
7.檢測步驟
7.1、將所需微孔板條在微孔架上固定,按1份標準品稀釋液加19份超純水或去離子水提前稀釋成標準品稀釋液的工作原理;
7.2、移取10μl稀釋好的標準品以及樣本至相應微孔中,樣本需稀釋100000倍以上。
提前稀釋標準品:加入標準品稀釋液100μl至凍干標準品瓶中使IgG終濃度達到100ng/ml,請嚴格控制在25~28℃,靜置10~15分鐘后輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,最高濃度為100ng/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)
7.3、 每孔加90μl標準品稀釋液,25~28℃孵育120分鐘;
7.4、 用洗滌液將微孔洗滌5次(推薦使用洗板機)。
重要提示:
洗滌液加入板孔中,需浸泡10秒,最后一次必須在干凈的吸水紙上用力拍打微孔,除去殘留洗滌液。洗滌操作的正確與否將影響整個實驗分析的靈敏度和精密度。
7.5、每孔加50μlHRP耦連的抗IgG抗體,,25~28℃孵育60分鐘;
7.6、用洗滌液將微孔洗滌5次(推薦使用洗板機)。
7.7、每孔加入100ul底物溶液。室溫避光孵育15分鐘(25-28℃)。
7.8、每孔加入50ul終止液,終止酶反應。并在450nm處測定OD值(參考波長600-650nm)。讀取OD值最好在10分鐘內完成。
8.結果計算
在方格座標紙上,以標準品的濃度作為橫坐標(對數刻度),對應的OD值作為縱坐標(線性刻度)。利用連接的標準曲線可讀出樣本的OD值對應的濃度值。試劑濃度需乘以稀釋倍數。
任何樣品濃度如果高于最高標準品濃度,樣品應用標準品稀釋液作適當稀釋后重新測量分析。所得結果乘以稀釋倍數后即樣品實際濃度。
9.參考數據及曲線
典型參考數據
濃度(ng/ml) | 典型OD值1 | 典型OD值2 | OD平均值 |
0 | 0.0892 | 0.0844 | 0.0868 |
3.125 | 0.2437 | 0.2161 | 0.2299 |
6.25 | 0.4529 | 0.4127 | 0.4328 |
12.5 | 0.6826 | 0.6214 | 0.652 |
25 | 0.9627 | 0.9295 | 0.9461 |
50 | 1.3792 | 1.3354 | 1.3573 |
100 | 1.9563 | 1.9107 | 1.9335 |
小鼠IgG參考標準曲線
10.靈敏度、特異性和重復性
1.靈敏度:多次重復結果表明,最小檢出量為1.24ng/ml。
2.特異性:本試劑盒采用特異性抗體識別小鼠IgG,包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3,檢測值為總的IgG濃度。
3.重復性:板內,板間變異系數均<10%.
貨號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 | 指令 |
HM-071 | 小鼠免疫球蛋白G ELISA試劑盒Mouse total IgG ELISA KIT | 96T/48T | ¥3400.00/2120.00.00 | 放入購物車 》 |
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