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    豬的白細胞介素6ELISA試劑盒Porcine IL- 6 ELISA KIT
    貨號:HP-02
    價格:¥3400.00/2120.00.00
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    豬白細胞介素6定量分析酶聯免疫檢測試劑盒

     

    本試劑盒僅供科研使用。用于體外定量檢測豬血清、血漿或細胞培養上清液中的IL-6濃度。使用前請仔細閱讀說明書并檢查試劑組分是否完整, 如有產品包裝破損或質量投拆,請在收到貨一個月之內聯系我們。

     

    IL-6簡介:

    白介素6IL-6)是一類多功能的蛋白,在宿主防御,急性期反應,免疫反應,造血功能,神經系統等方面起到重要的作用。白介素6根據來源不同是分子量從21到28kDa不同的單鏈蛋白。白介素6在多種細胞中都有表達,如T細胞、巨噬細胞、纖維原細胞、肝細胞、血管內皮細胞等。由于IL-6具有不同的活性,所以IL-6也被稱為干擾素β2(IFN-β2)、B細胞刺激因子-2(BSF-2)、雜交瘤細胞生長因子、肝細胞刺激因子、毒性T細胞分化因子、巨噬細胞粒細胞誘導因子(MGI-2A)。白細胞介素6在B-細胞向Ig分泌細胞的轉化過程起到重要的作用,參與了淋巴細胞和單核細胞的分化,誘導神經細胞在B-細胞,T-細胞,肝細胞,造血干細胞以及中樞神經系統的分化作用。此外,肌肉運動收縮作用后白細胞介素6會被釋放到血液中,進而能促進脂肪的分解并改善機體的胰島素耐受性。

     

    檢測原理:

    本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法檢測樣本中IL-6的濃度。IL-6捕獲抗體已預包被于酶標板上,當加入標本或參考品時,其中的IL-6會與捕獲抗體結合,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。當加入生物素化的抗豬IL-6抗體后,抗豬IL-6抗體與IL-6接合,形成夾心的免疫復合物,其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。隨后加入辣根過氧化物酶標記的親合素。生物素與親合素特異性結合,親合素連接的酶就會與夾心的免疫復合物連接起來;其它游離的成分通過洗滌的過程被除去。最后加入顯色劑,若樣本中存在IL-6將會形成免疫復合物,辣根過氧化物酶會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質,在加入終止液后呈黃色。通過酶標儀檢測,讀其450nm處的OD值,IL-6濃度與OD450值之間呈正比,通過參考品繪制標準曲線,對照未知樣本中OD值,即可算出標本中IL-6濃度。

     

    IL-6定量分析酶聯免疫檢測試劑盒組成:

     

    組分

    規格(96T/48T)

    豬IL-6預包被板

    12條/6

    樣本分析緩沖液

    5ml/3ml

    標準品稀釋液

    10ml/5ml

    豬IL-6標準品

    8支/4支(凍干)

    豬IL-6生物素化抗體

    10ml/5ml

    親和素連接的HRP酶

    10ml/5ml

    濃縮洗滌液 20×

    30ml/15ml

    TMB底物

    10ml/5ml

    中止液

    5ml/3ml

    封板膠紙

    3/2

    說明書

    1

    標本收集:

    1.標本的收集請按下列流程進行操作;

    A.細胞上清標本離心去除懸浮物后即可;

    B.血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;

    C.血漿標本,推薦用EDTA的方法收集;

    D.若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融。

    2.血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑;

    3.標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。

    4.請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確。

    注:豬血清或血漿樣本請用樣本分析緩沖液做倍比稀釋后再檢測。

     

    注意事項:

    1.試劑盒請保存在28℃。

    2.濃縮洗滌液因在低溫下可能有結晶,請水浴加熱使結晶完全溶解后再配制工作液。

    3.標準品復溶加樣后,剩余部份請丟棄。

    4.底物請勿接觸氧化劑和金屬。

    5.加樣時,請及時更換槍頭,避免交叉污染。

    6.嚴禁混用不同批號的試劑盒組份。

    7.充分混勻對保證反應結果的準性很重要,在加液后請輕輕叩擊邊緣以保證混勻。

    8.室溫反應,請嚴格控制在25-28℃。

    9.洗滌過程是至關重要的,洗滌不充分會使精確度下降并導致結果誤差較大。

    10.試驗中標準品和樣本檢測時建議作雙復孔。

    11.加樣過程中避免氣泡的產生。

    12.血清和血漿標本的檢測時,檢測抗體的孵育時間應適當延長

     

    檢測前準備工作:

    1.試劑盒自冰箱中取出后應置室溫(25-28℃)平衡20分鐘;每次檢測后剩余試劑請及時于2~8℃保存。

    2.將濃縮洗滌液用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加19份水)。

    3.如有5x標準品稀釋液,請按所需量用雙蒸水或去離子水稀釋(1份加4份水)。

    4.標準品: 按標簽復溶體積加入pH8.4的1%BSA/PBS緩沖液使IL-6終濃度達到8000pg/ml,室溫反應,請嚴格控制在25~28℃,靜置10~15分鐘后輕輕混懸(建議抽吸幾次)待徹底溶解,用標準品稀釋液倍比梯度稀釋后依次加入檢測孔中。(標準曲線取七個點,最高濃度為8000 pg/ml,標準品稀釋液直接加入作為0濃度.)

    圖片2.png 

    洗滌方法:

    自動洗板機或豬工洗板:每孔洗滌液為300ul,注入與吸出間隔15-30秒。洗板5次。最后一次洗板完成后將板倒扣著在厚吸水紙上用力拍干。

     

    實驗過程需自備的材料:

    1.不同規格的加樣槍及相應的槍頭;   

    2.酶標儀;

    3.自動洗板機;                     

    4.去離子水或雙蒸水;

     

    操作步驟:

    1.通過計算并確定一次性實驗所需的板條數,取出所需板條放置在框架內,暫時用不到板條請放回鋁箔袋密封,保存于4℃。

    2.建議設置本底較正孔,即空白孔,設置方法為該孔只加TMB顯色液和中止液。每次實驗均需做標準品對照并畫出標準曲線。

    3.分別將標本或不同濃度標準品(100ul/孔)加入相應孔中,用封板膠紙封住反應孔,室溫(25-28℃)孵育120分鐘。對于血清或血漿標本,請加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。      

    4.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    5.加入生物素化抗體工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,室溫(25-28℃)孵育60分鐘。   

    6.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    7.加入親和素連接的HRP酶工作液(100ul/)。用封板膠紙封住反應孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。   

    8.洗板5次,且最后一次置厚吸水紙上拍干。

    9.加入顯色劑TMB100ul/孔,避光室溫(25-28℃)孵育20分鐘。

    10.加入中止液50ul/孔,混勻后即刻測量OD450值。

     

    結果判斷:

    1.復孔的值在20%的差異范圍內結果才有效,復孔的值平均后可作為測量值。

    2.每個標準品或標本的OD值應減去本底校正孔的OD值。

    3.手工繪制標準曲線。以標準品濃度作橫坐標,OD值作縱坐標,以平滑線連接各標準品的坐標點。通過標本的OD值可在標準曲線上查出其濃度。

    4.若標本OD值高于標準曲線上限,應適當稀釋后重測,計算濃度時應乘以稀釋倍數。

    典型數值和參考曲線

    濃度pg/ml

    典型OD1

    典型OD2

    OD平均值

    0

    0.113

    0.145

    0.129

    250

    0.292

    0.336

    0.314

    500

    0.437

    0.521

    0.479

    1000

    0.774

    0.704

    0.739

    2000

    1.011

    1.071

    1.041

    4000

    1.406

    1.504

    1.455

    8000

    2.065

    2.399

    2.232

    IL-6參考標準曲線

    圖片1.png 

     

    注意:本圖僅供參考,應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。

     

    靈敏度,特異性和重復性:

    1.靈敏度:多次重復結果表明,最小檢出量為114pg/ml。

    2.特異性:與人、小鼠、大鼠的IL-6均無交叉反應性。

    3.重復性:板內,板間變異系數均<10%.

     

    參考文獻:

    1. Muller-Newen, G. (2003) Sci. STKE 2003:PE40.

    2. Rose-John, S. et al. (2006) J. Leukoc. Biol. 80:227.

    3. Mitsuyama, K. et al. (2006) Clin. Exp. Immunol. 143:125.

    4. Hodge, D.R. et al. (2005) Eur. J. Cancer 41:2502.

    5. Jung, H.C. et al. (1995) J. Clin. Invest. 95:55.

    6. Jones, S.A. (2005) J. Immunol. 175:3468.

    7. Bihl, M.P. et al. (2002) Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 27:48.

    8. Naugler, W.E. and M. Karin (2008) Trends Mol. Med. 14:109.

    9. Alberti, L. et al. (2005) Cancer Res. 65:2.

    10. Schuett, H. et al. (2009) Thromb. Haemost. 102:215.


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